Источником ошибок при подсчете эритроцитов в камере горяева

Взятие крови на эритроциты. Подсчет эритроцитов в крови.

У
стройство
камеры Горяева.

Камера
Горяева имеет 2 сетки, и это позволяет
одновременно произвести подсчет и
эритроцитов и лейкоцитов. Камера
изготовлена из толстого стекла, имеет
глубину 0,1мм и площадь сетки камеры –
9 мм ².

Подготовка
счетной камеры Горяева

1. Протереть корпус
   камеры с сеткой и покровное стекло
   насухо

2. Притереть покровное
   стекло к поверхности камеры Горяева
   до появления «радужных колец» (колец
   Ньютона)

3. Пипеткой
   отобрать каплю разведенной крови из
   пробирки, предварительно перемешав
   содержимое и поднести пипетку к краю
   покровного стекла. Камера заполняется
   по принципу капиллярности.

4. Кровь
   должна заполнить равномерно все
   пространство камеры с сеткой.

5. Камеру
   оставляют на 1-2 минуты для оседания
   форменных элементов, и затем производят
   подсчет с помощью микроскопа при малом
   увеличении (объектив х 8, окуляр х 10),
   конденсор опущен, диафрагма закрыта).

Источники
ошибок при подсчете форменных элементов
крови.

1. Образование
   сгустка. Взятие крови следует производить
   быстро и ловко, т.к. образование сгустка
   приводит к снижению количества форменных
   элементов.

2. Образование
   пузырька воздуха в счетной камере
   Горяева

3. Неправильное
   притирание покровного стекла искажает
   объем камеры и, следовательно, результат
   исследования.

4. К
   подсчету форменных элементов приступают
   через 1-2 минут после заполнения камеры

5. Недоброкачественность
   разводящей жидкости может привести к
   разрушению клеток

6. Недостаточное
   количество подсчитанных квадратов,
   нарушение техники подсчета в квадрате.

Устройство сетки
камеры Горяева

Правила подсчета
форменных элементов в сетке камеры
Горяева.

Реактивы и
оборудование:

1. 0,9%
   р-р хлорида натрия

2. центрифужная
   пробирка

3. пипетка Сали

4. пипетка на 5 мл

5. камера Горяева.

Подсчет эритроцитов.

Эритроциты
– это красные кровяные тельца, их диаметр
составляет 7,5 – 8,3 мкм. Нормальные
показатели эритроцитов в крови составляют
для мужчин 4,0 – 5,1 х 10¹²/л,
у женщин – 3,7 – 4,7 х 10¹²/л.

Для
подсчета эритроцитов кровь разводят в
200 раз. В сухую пробирку отмеривают 4 мл
разводящей жидкости – 0,9% р-ра хлорида
натрия. Пипеткой Сали набирают 0,02 мл
крови. Обтирают носик пипетки сухой
ваткой и вносят кровь на дно пробирки
с разводящей жидкостью, затем пипетку
Сали промывают в верхнем слое жидкости
(3 раза). Содержимое пробирки перемешивают
и оставляют стоять в штативе до момента
счета. Рекомендуется считать эритроциты
в ближайшие 2-3 часа после взятия крови,
а при анемиях – сразу после взятия, так
как эритроциты могут разрушиться.

Подсчет
эритроцитов в 1 литре крови производят
в счетной камере Горяева. Подсчет
производят в 5 больших квадратах,
разделенных на 16 маленьких по диагонали
сетки камера Горяева (80
малых квадратов). Объем 1 малого квадрата
составляет 1/4000
мкл. Разведение
крови составляет 200
раз (4 мл 0,9% р-ра хлорида натрия и 0,02 мл
крови), площадь сетки камеры Горяева 9
мм²,
глубина камеры 0,1 мм.

Расчет
количества эритроцитов в 1 литре крови
производят, исходя из разведения крови,
числа сосчитанных квадратов, объема 1
малого квадрата по формуле:

Эритроциты
= Х х
4000 х 200
х 10 ⁶

80

где:
Х – это количество эритроцитов сосчитанных
в камере Горяева.

Сокращенная формула
подсчета эритроцитов в 1 литре крови:

Эритроциты
= Х х 10 000 х 10 ⁶/л

Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]

• #
• #
• #

  25.03.20151.33 Mб22Общие методы I Редакция ( ГФXII).rtf

• #
• #
• #
• #
• #
• #
• #
• #

ПМ
02. МДК 02.01. Проведение лабораторных гематологических исследований

РАЗДЕЛ 2. Методы
гематологических исследований. Проведение общего анализа крови

Тема 2.2. Подсчет
количества эритроцитов. Вычисление цветового показателя.

План:

1.    
Устройство камеры и сетки Горяева.

2.    
Подсчет количества эритроцитов в камере Горяева.
Клинико-диагностическое значение.

3.    
Подсчет среднего содержания гемоглобина в одном
эритроците (СГЭ).

4.    
Вычисление цветового показатели (ЦП). Клиническое
значение.

1.    
Устройство камеры и сетки Горяева.

Принцип метода состоит в подсчете эритроцитов в камере
Горяева. Для уменьшения концентрации форменных элементов и создания удобной для
подсчета их концентрации кровь предварительно разводится стандартным образом.

Камера Горяева представляет собой толстое предметное стекло, прорезанное
четырьмя поперечными бороздами. Борозды делят стекло на пластинки — две боковые
и среднюю. Средняя пластинка на 0,1 мм ниже боковых. Она разделена поперечной
бороздкой на 2 равные части. На каждой половине средней пластинки нанесена
сетка Горяева. Принадлежностью камеры служит шлифованное покровное стекло. Его
следует наложить так, чтобы оно покрыло обе боковые и среднюю пластинки. Нажимая
большими пальцами на края стекла, его притирают к боковым пластинкам до
появления радужных колец (кольца Ньютона).

Так
как боковые пластинки выше средней, между нею и покровным стеклом остается
щель. Это и есть камера, в которую заливают разведенную кровь. Глубина камеры
0,1 мм.

Нанесенная
на дно камеры сетка Горяева квадратная. Сторона ее — 3 мм, площадь — 9 мм^».
Сетка разграфлена на 225 больших квадратов — 15 по горизонтали и 15 по вертикали.
Часть больших квадратов (через два на третий) разделена на 16 малых квадратов.
Сторона малого квадра­та равна 1/20 мм .

Камера была разработана профессором
Казанского университета Горяевым Н.К. Благодаря увеличенному объему сетки
отличается большей точностью подсчета, по сравнению с другими камерами (Тома,
Цейса, Тюрка, Бюркера).

Рис 1. Сетка камеры Горяева

Рис 2. Большой (1) и малый (2)
квадраты сетки камеры Горяева

Рис 3. 225 больших квадратов сетки
камеры Горяева

Рис 4. 100 больших квадратов сетки
камеры Горяева

Рис 5. Большой квадрат камеры
Горяева разделенный

на 16 малых квадратов.

Уход за камерой Горяева.

Между работой камера должна храниться в
сухом месте. После работы камера дезинфицируется погружением на 30 минут в 70%
раствор этилового спирта, или на 60 минут в 4% раствор формалина, после чего
камера промывается дистиллированной водой и протирается мягкой салфеткой. 

2.      Подсчет количества
эритроцитов в камере Горяева. Клиническое значение.

Правило подсчета клеток в квадрате
(правило Егорова).

В квадрате считаются клетки,
лежащие внутри его, а также касающиеся левой и верхней границ.
Клетки, касающиеся правой и нижней границ при подсчете, не
учитываются.

Принцип. Подсчет эритроци­тов под микроскопом в определенном количе­стве квадратов счетной
сетки и пересчет на 1 мкл крови, исходя из объема квадратов и разведе­ния
крови.

Реактивы.

1.     3% или

2.     0,9 % раствор хлорида натрия (физ.раствор).

Специальное
оборудование.

1.
Счетная камера Горяева.

2.
Микроскоп.

Ход
исследования. Разводят иссле­дуемую кровь в 200
раз.

Для
этого в сухую про­бирку наливают 4 мл реактива 1 или 2. Пипет­кой Сали
набирают 0,02 мл крови (20 мкл). Кончик пипетки вы­тирают фильтровальной
бумагой или марлевой салфеткой, а кровь выдувают на дно пробирки. Пипетку тща­тельно
промывают в верхнем слое жидкости, повторно набирая ее и выдувая в пробирку,
содержимое пробирки перемешивают и остав­ляют стоять до момента счета
(рекомендуется считать эритроциты в ближайшие 2-3 ч после взятия крови, а при
гемолитических и В 12-дефи­цитных анемиях — сразу после взятия, так как
эритроциты могут разрушиться). Недопустимо оставлять взятую кровь с
несосчитанными эри­троцитами на следующий день, так как эритро­циты частично
разрушаются.

Подготавливают
счетную камеру: протирают насухо камеру с сеткой и
покровное стекло, за­тем покровное стекло притирают к камере, слегка надавливая
на стекло таким образом, чтобы по краям его появились радужные полосы (это сви­детельствует
о требуемой высоте камеры — 0,1 мм).

Заполняют
счетную камеру разведенной кровью: предварительно
несколько раз тщатель­но встряхивают содержимое пробирки, затем пастеровской
пипеткой или стеклянной палочкой отбирают каплю разведенной крови и подносят ее
к краю покровного стекла, следя за тем, чтобы она равномерно без пузырьков
воздуха запол­нила всю поверхность камеры с сеткой, не зате­кая в бороздки. По
закону капиллярности жид­кость затекает под стекло, заполняя камеру.

После
заполнения камеру нужно положить на стол на 2-3 мин, пока движение жидкости в
ней не прекратится, и клетки не расположатся неподвижно на фоне квадратов
сетки.

Подсчет
производят под «малым» увеличением микро­скопа (об.8, ок.10 или 15), конденсор
должен быть опущен, а диафрагма закрыта. Находят верхний левый край сетки. Подсчет
эритроцитов ведут по диагонали: от верхнего левого угла – к нижнему правому.

После всех сокращений получают
формулу: Х= а х 10 000

Правила учета
данных:

— к данному квадрату
принадле­жат клетки, находящиеся большей своей половиной внут­ри него;

— клетки, разделенные
пограничной линией попо­лам, считают только на верхней и левой границе
квадрата;

— клетки же, лежащие
большей своей половиной вне данно­го квадрата не считают вовсе.

Клинико-диагностическое
значение. Снижение числа эритроцитов крови называется эритроцитопенией
или эритропенией и является одним из ос­новных лабораторных критериев анемии.
Однако степень эритроцитопении широко варьирует при разных формах
малокровия. Так, при наиболее распространенном заболевании — железодефицитной
анемии на почве хронических кровопотерь — количество эритроцитов может быть нор­мальным
или нерезко сниженным (3• 10⁶ — 3,6-10⁶ в 1
мкл, или 3-10′²/л — 3,6-10^|2/л). При острой кровопотере,
В12-дефицитной анемии (в стадии рецидива), гипопластической анемии,
гемолитических анемиях (в период криза) число эритроцитов в крови может
значительно сни­зиться и достигнуть I -10⁶ в 1 мкл, или 1 • 10^|2/л
и менее.

Повышение
количества эритроцитов в кро­ви — эритроцитоз — может быть
обусловлен многими причинами. Значительный эритроцитоз (6,5-10⁶—8,5-10^е в
1 мкл, или 6,5-10^|2/л — 8,5-10^|2/л крови) является одним
из важных лабораторных симптомов эритремии (рака крови). Другие гемобластозы
миелопролиферативной природы (сублейкемический миелоз или миелофиброз и
хронический миелолейкоз) реже сопровождают­ся эритроцитозом и только в
начальной стадии заболевания.

3.      Подсчет
среднего содержания гемоглобина в одном эритроците (MCH; MCHC; MCV)

Среднее содержание гемоглобина в 1 эритроците (СГЭ, МСН )
является важным физиологическим показателем, характеризующим эритропоэз.
Эритроциты с нормальным содержанием гемоглобина называют нормохромными,
с пониженным содержанием — гипохромными, с повышенным — гиперхромными.

Величина СГЭ выражает абсолютное соотношение между
гемоглобином и эритроцитами, содержащимися в 1 л крови. Вместе с тем,  при
проведении клинических анализов крови это соотношение выражают и относительной
величиной, называемой цветовым показателем (ЦП).

MCH – meancorpuscular hemoglobin. Данный индекс отражает абсолютное содержание
гемоглобина в одном эритроците в пикограммах (пг).

Зная абсолютное содержание гемоглобина (НЬ) крови и число
эритроцитов в 1 л крови, можно рассчитать среднее массовое содержание
гемоглобина в одном эритроците (СГЭ):

СГЭ= 

Например, содержание НЬ в 1 л крови человека —
150 г/л. Число эритроцитов в 1 л крови — 4,9 х .

Рассчитаем
СГЭ:

СГЭ =  =
30,6 *  г,
или 30,6 пг (пикограмм)

 Норма СГЭ
для взрослых мужчин и женщин составляет от 27 до 33,3 пг.

MCHC– meancorpuscular hemoglobin concentration. Этот индекс
отражает степень насыщенности эритроцита гемоглобином и выражается в %.
То есть по данному индексу можно сказать, сколько процентов составляет
содержание гемоглобина в одном эритроците.

МСНС высчитывают следующим образом:

МСНС = (гемоглобин
(г/л)/гематокрит(%))*10 = %

Норма МСНС: 30 – 38%

MCV — meancorpuscular volume.
Этот показатель отражает средний объём эритроцита,
выраженный в микронах кубических (мкм3) или фемтолитрах (фл). Рассчитывают MCV
по формуле:
MCV = гематокрит (%)*10/количество эритроцитов(Т/л) = мкм3 (фл)

Норма MCV: 80-95
мкм3 (фл)

4.
Вычисление цветового показатели (ЦП). Клиническое значение.

Цветовой показатель (ЦП) –
отражает соотношение между концентрацией гемоглобина и числом эритроцитов в
крови. Это расчетная величина. Его вычисляют путем деления утроенного числа
гемоглобина в граммах на литр, на первые три цифры числа эритроцитов.

Формула:
Гемоглобин (г/л) х 3/первые 3 цифры числа эритроцитов.

Норма:
0,86-1,1(1,15)

Нормальными
считают значения ЦП от 0,8 до 1,1 — нормохромазия. Превышение ЦП при
патологических состояниях верхнего предела нормы называют гиперхромазией,
уменьшение за предел нижнего уровня нормы — гипохромазией.

Пример расчета: концентрация гемоглобина 150
г/л, число эритроцитов 4,5 х 10 12 в 1 л крови= 150х 3/ 450= 1,0

Клиническое
значение. По вели­чине цветового показателя принято
делить ане­мии на гипохромные, нормохромные и гиперхромные.
Гипохромные анемии (с цветовым по­казателем менее 0,86) широко распространены и
наблюдаются, прежде всего при дефиците же­леза, вызванном различными причинами.
Осо­бенно выраженной гипохромией (0,6—0,5 и ниже) характеризуются
железодефицитные ане­мии, обусловленные хроническими кровопотерями.

Менее
выраженная гипохромия эритроцитов (0,7—0,8) наблюдается при
железодефицитной анемии беременных, при инфекциях, опухолях. Редко встречаются
гипохромные анемии, не свя­занные с дефицитом железа и обусловленные нарушением
синтеза гемоглобина в результате свинцового отравления или наследственного по­вреждения
синтеза порфиринов и цепей глобина.

Повышение
цветового показателя — гиперхромия — является характерным лабораторным
признаком различных В-дефицитных и фолиево-дефицитных анемий. Особенно выражена
гиперхромия эритроцитов (1,2—1,3) при рецидиве анемии Аддисона — Бирмера.
Нормохромные анемии наблюдаются при некоторых гемолитиче­ских формах
малокровия, острых кровопотерях, лейкозах, сопутствуют циррозу печени.

Закрепление по теме.

Письменно ответить на вопросы:

1.     Опишите устройство камеры и сетки Горяева.

2.     Как выполняют разведение крови для подсчета эритроцитов? Какие реактивы
для этого используют?

3.     Какие правила должны строго соблюдаться при подсчете эритроцитов в
камере Горяева?

4.     Напишите расчетную формулу для эритроцитов.

5.     Каковы источники ошибок при подсчете эритроцитов в камере?

6.     Что такое СГЭ и как его рассчитывают? Укажите референтные значения.

7.     Что такое ЦП и как его рассчитывают? Укажите референтные значения.

8.     Что такое эритроцитоз? Эритропения?

9.     Какие термины применяют при снижении ЦП? Повышении ЦП? Нормальных
значений ЦП?

Решить письменно задачи:

Задача 1.

В общем анализе крови: количество эритроцитов
3,8*10 ¹² /л, гемоглобин – 140 г/л. Цветовой показатель —  1,2.

Задания:

1.          
Напишите формулу
расчета цветового показателя и рассчитайте самостоятельно. Правильно ли
проведен расчет цветового показателя?

2.          
Назовите нормы
цветового показателя, что он отражает?

Задача 2.

В общем анализе крови: количество эритроцитов
5,0*10 ¹² /л, гемоглобин – 160 г/л. Цветовой показатель —  0,96.

Задания:

1.          
Напишите формулу
расчета цветового показателя и рассчитайте самостоятельно. 

2.          
Правильно ли проведен
расчет цветового показателя?

Задача 3.

В общем анализе крови: количество эритроцитов
4,5*10 ¹² /л, гемоглобин – 120 г/л. Цветовой показатель —  1,0.

Задания:

1.          
Напишите формулу
расчета цветового показателя и рассчитайте самостоятельно. 

2.          
Правильно ли проведен
расчет цветового показателя?

Задача 4.

В общем анализе крови: количество эритроцитов
3,9*10 ¹² /л, гемоглобин – 130 г/л. СГЭ —  27 пг.

Задания:

1.          
Напишите формулу
расчета СГЭ и рассчитайте самостоятельно. 

2.          
Правильно ли проведен
расчет СГЭ?

Задача 5.

В общем анализе крови: количество эритроцитов
3,5*10 ¹² /л, гемоглобин – 110 г/л. СГЭ —  30 пг.

Задания:

1.          
Напишите формулу
расчета СГЭ и рассчитайте самостоятельно. 

2.          
Правильно ли проведен
расчет СГЭ?

Задача 6.

В общем анализе крови: количество эритроцитов 5*10
¹² /л, гемоглобин – 160 г/л. СГЭ —   32 пг.

Задания:

1.          
Напишите формулу
расчета СГЭ и рассчитайте самостоятельно. 

2.          
Правильно ли проведен
расчет СГЭ?

Copyright © WWW.MED.UZ — Медицинский портал Узбекистана, 2005-2011

Все права защищены. Вся информация, размещённая на данном веб-сайте, предназначена только для

персонального использования и не подлежит дальнейшему воспроизведению и/или распространению

в какой-либо форме, иначе как с письменного разрешения компании MedNetSoft